Beginsels en metodes van kwantitatiewe analise deur vloeistofchromatografie

Die skeidingsmeganisme van vloeistofchromatografie is gebaseer op die verskil in die affiniteit van die komponente in die mengsel vir die twee fases.

Volgens die verskillende stilstaande fases word vloeistofchromatografie verdeel in vloeistof-vastestofchromatografie, vloeistof-vloeistofchromatografie en gebindfasechromatografie.Die mees gebruikte is vloeistof-vaste stof chromatografie met silikagel as vuller en gebonde fase chromatografie met mikrosilika as matriks.

Volgens die vorm van stilstaande fase kan vloeistofchromatografie verdeel word in kolomchromatografie, papierchromatografie en dunlaagchromatografie.Volgens die adsorpsiekapasiteit kan dit verdeel word in adsorpsiechromatografie, partisiechromatografie, ioonuitruilchromatografie en gelpermeasiechromatografie.

In onlangse jare is 'n hoëdruk vloeistofvloeistelsel by die vloeistofkolomchromatografiestelsel gevoeg om die mobiele fase vinnig onder hoë druk te laat vloei om die skeidingseffek te verbeter, dus hoë-doeltreffendheid (ook bekend as hoëdruk) vloeistofchromatografie na vore gekom het.

DEEL
01 Beginsel van Kwantitatiewe Analise van Vloeistofchromatografie

Om te kwantifiseer op grond van kwalitatiewe, word suiwer stowwe as standaarde vereis;

Vloeistofchromatografie kwantifisering is 'n relatief kwantitatiewe metode: dit wil sê, die hoeveelheid van die analiet in die mengsel word geskat uit 'n bekende hoeveelheid suiwer standaardmonster

DEEL
02 Basis vir kwantifisering deur vloeistofchromatografie

Die hoeveelheid van die gemete komponent (W) is eweredig aan die responswaarde (A) (piekhoogte of piekoppervlakte), W=f×A.

Kwantitatiewe korreksiefaktor (f): Dit is die proporsionaliteitskonstante van die kwantitatiewe berekeningsformule, en die fisiese betekenis daarvan is die hoeveelheid van die gemete komponent wat deur die eenheidsreaksiewaarde (piekoppervlakte) verteenwoordig word.

Die kwantitatiewe korreksiefaktor kan verkry word uit die bekende hoeveelheid standaardmonster en sy responswaarde.

Meet die responswaarde van die onbekende komponent, en die hoeveelheid van die komponent kan verkry word deur die kwantitatiewe korreksiefaktor.

DEEL
03 Algemene terme in kwantitatiewe analise

Monster (monster): 'n oplossing wat 'n analiet bevat vir chromatografiese analise.Verdeel in standaard en onbekende monsters.

Standaard: 'n Suiwer produk met 'n bekende konsentrasie.Onbekende monster (onbekend): Die mengsel waarvan die konsentrasie getoets moet word.

Monstergewig: Die oorspronklike weeg van die monster wat getoets moet word.

Verdunning: Die verdunningsfaktor van die onbekende monster.

Komponent: die chromatografiese piek wat kwantitatief ontleed moet word, dit wil sê die analiet waarvan die inhoud onbekend is.

Hoeveelheid komponent (hoeveelheid): die inhoud (of konsentrasie) van die stof wat getoets moet word.

Integeriteit: Die berekeningsproses om die piekoppervlakte van 'n chromatografiese piek deur 'n rekenaar te meet.

Kalibrasiekromme: 'n Lineêre kurwe van komponentinhoud teenoor responswaarde, vasgestel uit 'n bekende hoeveelheid standaardstof, wat gebruik word om die onbekende inhoud van die analiet te bepaal.

DEEL
04 Kwantitatiewe ontleding van vloeistofchromatografie

1. Kies 'n chromatografiese metode wat geskik is vir kwantitatiewe analise:

l Bevestig die piek van die bespeurde komponent en bereik 'n resolusie (R) groter as 1,5

l Bepaal die konsekwentheid (suiwerheid) van die chromatografiese pieke van die getoetste komponente

l Bepaal die opsporingslimiet en kwantifiseringsgrens van die metode;sensitiwiteit en lineêre omvang

2. Stel 'n kalibrasiekurwe op met standaardmonsters van verskillende konsentrasies

3. Gaan die akkuraatheid en akkuraatheid van kwantitatiewe metodes na

4. Gebruik die ooreenstemmende chromatografiebestuursagteware om monsterinsameling, dataverwerking en rapporteerresultate te implementeer

DEEL
05 Identifikasie van kwantitatiewe pieke (kwalitatief)

Identifiseer elke chromatografiese piek wat gekwantifiseer moet word, kwalitatief

Gebruik eers die standaardmonster om die retensietyd (Rt) van die chromatografiese piek wat gekwantifiseer moet word, te bepaal.Deur die retensietyd te vergelyk, vind die komponent wat ooreenstem met elke chromatografiese piek in die onbekende monster.Die chromatografiese kwalitatiewe metode is om die retensietyd met die standaardmonster te vergelyk.Die maatstaf Onvoldoendeverdere bevestiging (kwalitatief)

1. Standaard optelmetode

2. Gebruik terselfdertyd ander metodes: ander chromatografiese metodes (verander die meganisme, soos: gebruik van verskillende chromatografiese kolomme), ander detektors (PDA: spektrumvergelyking, spektrumbiblioteeksoektog; MS: massaspektrumanalise, spektrumbiblioteeksoektog)

3. Ander instrumente en metodes

DEEL
06 Bevestiging van kwantitatiewe piekkonsekwentheid

Bevestig chromatografiese piek konsekwentheid (suiwerheid)

Maak seker dat daar slegs een gemete komponent onder elke chromatografiese piek is

Kyk vir interferensie van mede-eluerende stowwe (onsuiwerhede)

Metodes vir bevestiging van chromatografiese piekkonsekwentheid (suiwerheid)

Vergelyk spektrogramme met Fotodiode Matrix (PDA) Detectors

Pieksuiwerheidsidentifikasie

2996 Purity Angle Theory

Kwantitatiewe metodes wat algemeen in DEEL 07 gebruik word

Standaardkurwemetode, verdeel in eksterne standaardmetode en interne standaardmetode:

1. Eksterne standaardmetode: die meeste gebruik in vloeistofchromatografie

'n Reeks standaardmonsters van bekende konsentrasies is voorberei deur gebruik te maak van suiwer monsters van die verbindings om as standaardmonsters getoets te word.in die kolom ingespuit tot sy responswaarde (piekoppervlakte).
Binne 'n sekere omvang is daar 'n goeie lineêre verband tussen die konsentrasie van die standaardmonster en die responswaarde, naamlik W= f×A , en 'n standaardkromme word gemaak.

Spuit die onbekende monster onder presies dieselfde eksperimentele toestande in om die responswaarde van die komponent wat gemeet moet word te verkry.Volgens die bekende koëffisiënt f kan die konsentrasie van die komponent wat gemeet moet word, verkry word.

Die voordele van die eksterne standaardmetode:eenvoudige bewerking en berekening, dit is 'n algemeen gebruikte kwantitatiewe metode;dit is nie nodig dat elke komponent opgespoor en geëlueer word nie;standaardmonster word vereis;die metingstoestande van standaardmonster en onbekende monster moet konsekwent wees;die inspuitvolume moet presies wees.

Nadele van die eksterne standaardmetode:Die eksperimentele toestande moet hoog wees, soos die sensitiwiteit van die detektor, die vloeitempo en die samestelling van die mobiele fase kan nie verander word nie;die volume van elke inspuiting moet goeie herhaalbaarheid hê.

2. Interne standaard metode: akkuraat, maar lastig, die meeste gebruik in standaardmetodes

'n Bekende hoeveelheid van die interne standaard word by die standaard gevoeg om 'n gemengde standaard te maak, en 'n reeks werkstandaarde van bekende konsentrasie word voorberei.Die molverhouding van standaard tot interne standaard in die gemengde standaard bly onveranderd.Spuit in die chromatografiese kolom en neem (standaard monster piek area/interne standaard monster piek area) as die responswaarde.Volgens die lineêre verband tussen die responswaarde en die konsentrasie van die werkstandaard, naamlik W= f×A , word 'n standaardkromme gemaak.

'n Bekende hoeveelheid interne standaard word by die onbekende monster gevoeg en in die kolom ingespuit om die responswaarde van die komponent wat gemeet moet word te verkry.Volgens die bekende koëffisiënt f kan die konsentrasie van die komponent wat gemeet moet word, verkry word.

Die kenmerke van die interne standaardmetode:Tydens die operasie word die monster en die interne standaard saam gemeng en in die chromatografiese kolom ingespuit, solank die verhouding van die hoeveelheid van die gemete komponent tot die interne standaard in die gemengde oplossing konstant is, die verandering van die monstervolume sal nie die kwantitatiewe resultate beïnvloed nie..Die interne standaardmetode verreken die invloed van die monstervolume, en selfs die mobiele fase en detektor, so dit is meer akkuraat as die eksterne standaardmetode.

DEEL
08 Faktore wat Kwantitatiewe Analise Resultate beïnvloed

Swak akkuraatheid kan veroorsaak word deur:

Verkeerde piekarea-integrasie, monsterontbinding of onsuiwerhede ingebring tydens monstervoorbereiding, monsterflessie nie verseël nie, monster- of oplosmiddelvervlugtiging, verkeerde monstervoorbereiding, monsterinspuitingsprobleme, verkeerde interne standaardvoorbereiding

Moontlike redes vir swak akkuraatheid:

Verkeerde piekintegrasie, inspuitings- of inspuitprobleme, monsterontbinding of onsuiwerhede wat tydens monstervoorbereiding ingebring word, chromatografiese probleme, verswakte detektorrespons